超低分子量蛋白電泳試劑盒（貨號(hào)：RTD6120）
● 產(chǎn)品組成：
|
組分貨號(hào)
|
組分
|
名稱
|
規(guī)格
|
貯存
|
運(yùn)輸
|
|
RTD6120-01
|
組分1
|
2×多肽電泳濃縮膠緩沖液
|
15 ml
|
4℃
|
常溫
|
|
RTD6120-02
|
組分2
|
2×多肽電泳分離膠緩沖液
|
30 ml
|
4℃
|
常溫
|
|
RTD6120-03
|
組分3
|
2×PAA溶液 超低濃縮膠用
|
15 ml
|
4℃
|
常溫
|
|
RTD6120-04
|
組分4
|
2×PAA溶液 超低分離膠用
|
30 ml
|
4℃
|
常溫
|
|
AP020P
|
組分5
|
10% APS（干粉）
|
5 ml
|
常溫
|
常溫
|
|
TA0761-01
|
組分6
|
TEMED
|
0.5 ml
|
常溫
|
常溫
|
|
CB010P
|
組分7
|
10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)
|
500 ml（干粉）
|
常溫
|
常溫
|
|
TP050
|
組分8
|
2×Tricine 上樣緩沖液（含還原劑）
|
1 ml
|
-20℃
|
常溫
|
|
RTD6202-02
|
組分9
|
FastBlue蛋白染色液
|
500 ml
|
常溫
|
常溫
|
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒含有超低分子量蛋白電泳（多肽電泳）全套試劑，可以用來檢測(cè)1-20kd的多肽大小。本試劑盒可配制至少10塊常規(guī)大小的PAGE膠（8×10cm）。具有以下特點(diǎn)：
1 適用范圍廣：2×多肽電泳緩沖液和2×PAA溶液中不含有SDS，適用于多肽的變性和非變性電泳。
2 分辨率高：凝膠緩沖液獨(dú)特配方，可以有效分離1-5kD多肽。
3 穩(wěn)定性高：凝膠緩沖液pH為中性，存放時(shí)間長(zhǎng)。
4 使用方便：配制凝膠時(shí)只需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝膠。
● 貯存和效期：
按照標(biāo)簽溫度貯存；開封后有效期一年。
● 使用說明：
一. 10% APS配制：
10% APS配制-5 ml：將APS干粉溶于5 ml滅菌水中，徹底溶解后分裝，1 ml/支，-20℃?zhèn)浯妫看稳∫还苁褂谩?0% APS應(yīng)盡量減少常溫存放時(shí)間，以防失效。10%APS在4℃有效期為一周，-20℃有效期6個(gè)月。若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長(zhǎng)，應(yīng)考慮更換使用-20度保存的10% APS。
二. 制膠：
I 配制分離膠
1．按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯或離心管中混合；立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
表一 （一塊1 mm mini膠用量）*
|
|
分離膠
|
濃縮膠
|
|
|
18％T /5 ml
|
5％T /2 ml
|
|
2×多肽電泳濃縮膠緩沖液
|
/
|
1 ml
|
|
2×多肽電泳分離膠緩沖液
|
2.5 ml
|
/
|
|
2×PAA溶液 超低濃縮膠用
|
/
|
1 ml
|
|
2×PAA溶液 超低分離膠用
|
2.5 ml
|
/
|
|
10％APS
|
25-50 μl**
|
20-30 μl
|
|
TEMED
|
2.5-5 μl
|
2 μl
|
注： * 如非必須，不要使用厚度1.5mm的凝膠，盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠，這樣會(huì)減少電泳后染色和脫色的時(shí)間。
** 凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)。可以根據(jù)表二的標(biāo)準(zhǔn)條件調(diào)節(jié)催化劑的加入量。
表二 超低凝膠制備凝固時(shí)間表
|
環(huán)境溫度
|
20℃
|
25℃
|
|
|
分離膠配制
|
濃縮膠配制
|
分離膠配制
|
濃縮膠配制
|
|
分離膠配制量
|
5 ml
|
-
|
5 ml
|
-
|
|
濃縮膠配制量
|
-
|
2 ml
|
-
|
2 ml
|
|
10%APS
|
50 μl
|
20 μl
|
25 μl
|
20 μl
|
|
TEMED
|
5 μl
|
2 μl
|
2.5 μl
|
2 μl
|
|
凝固時(shí)間
|
5-10 分鐘
|
20-30 分鐘
|
5-10 分鐘
|
20-30 分鐘
|
2．在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液，然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無水乙醇層，使凝膠表面保持平整。
3．靜置5-10分鐘，待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
II 配制濃縮膠
去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。
1．按照表一將不同成分加入到小燒杯或離心管中混合；立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
2．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
3．靜置20-30分鐘待凝膠聚合
三. 電泳：
1. 10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制：
將10×Tricine-Tris-SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一干凈的一升燒杯中，加入500ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調(diào)節(jié)pH，即配成500ml 10×TTS緩沖液。
表三 1×TTS緩沖液配制
|
|
1×TTS配制量 500 ml
|
1×TTS配制量 1000 ml
|
|
10×TTS
|
50 ml
|
100 ml
|
|
超純水
|
450 ml
|
900 ml
|
注：伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用500ml 1×TTS緩沖液。
2. 樣品處理：
待上樣的檢測(cè)樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat No：TP050]等體積混合，95℃處理5-10分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液，根據(jù)說明書上樣（預(yù)染Marker不能加熱處理，非預(yù)染Marker上樣前一般要95℃處理5-10分鐘）。
將電泳槽的內(nèi)槽加滿1×TTS緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器將梳孔吹洗干凈，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過處理）加入點(diǎn)樣孔，穩(wěn)壓電泳（表四），至藍(lán)色指示前沿至分離膠下沿位置時(shí)即可停止電泳。整個(gè)電泳過程大約需要2.5-3個(gè)小時(shí)。
表四 多肽電泳條件
|
恒電壓
|
150V
|
|
起始電流
|
60-75mA/板膠
|
|
結(jié)束電流
|
15-25mA/板膠
|
|
電泳時(shí)間
|
2.5-3小時(shí)
|
四. 染色（使用組分9-FastBlue蛋白染色液）：
● 用前必讀：
1 使用前如發(fā)現(xiàn)瓶中有少許沉淀，請(qǐng)混勻后使用。
2以下“使用方法”是針對(duì)0.75mm和1.0
mm厚度，10×10cm凝膠染色程序。
● 使用方法：
1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量染色液（以剛剛覆蓋過膠面為適），條帶1-2分鐘即可見。
2. 搖床上常溫?fù)u動(dòng)10-15分鐘。
3. 觀察結(jié)果。
● 注意事項(xiàng)：
1. 使用方法中的各種參數(shù)僅針對(duì)面積8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝膠，如果使用更大面積或更厚的凝膠，請(qǐng)加入更多的染色液并延長(zhǎng)染色的時(shí)間。
2. 常規(guī)染色所需的漂洗，固定，脫色步驟都無必要。
3. 本染色液可以重復(fù)利用1-2次，敏感性會(huì)有輕微下降，請(qǐng)延長(zhǎng)染色時(shí)間。
4.
本染色液有輕微腐蝕性，請(qǐng)帶手套操作。使用后，請(qǐng)蓋好瓶蓋，常溫密封保存。
緩沖液配方：
1.
10x Tricine-Tris-SDS緩沖液 (1
L) (Cat No:CB010P)
組分濃度：1 MTris,1 MTricine, 1% SDS
Tris
base 121.1 g
Tricine 179.2 g
SDS 10 g
ddH2O to1 L
Do not
adjust the pH (~pH 8.3)
2. 2×Tricine蛋白樣品加樣緩沖液（10ml） (Cat No:TP050)
組分濃度：100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT，0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250
1ml 1MTris-Cl pH6.8
2.4ml 甘油
0.8g SDS
0.31gDTT
2mg 考馬斯亮藍(lán)G-250
用滅菌ddH2O定容至10ml
混勻分裝-20℃貯存?zhèn)溆?
多肽電泳配套試劑
使用該產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：
1. [2016 IF=1.75] Metal-Chelate Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer
for Purification of ε-Poly-L-Lysine.
Product：RTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒
Author: Sipeng Li, Zhaoyang Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao.
Journal: Appl Biochem
Biotechnol. May 20 2017.
Institution：East
ChinaUniversity of Science and Technology
Paper link： https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-017-2495-3
2. [2020 IF=2.896] Rapid and sensitive detection of
Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia based on bacitracin-modified
Fe3O4@PDA magnetic beads combined with matrix-assisted laser desorption
ionization-time of flight mass spectrometry.
Product：RTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒；RTD6110 彩虹預(yù)染超低分子量蛋白Marker
Author: Feng Qin，Xiangmin Zhang
Journal: Analytical
Methods 2021，13，2804
Institution： Department of Chemistry, Fudan
University,
Paper link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34075956/